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用于监测3D细胞培养中的生物学的分析和工具

研究人员正转向3D培养方法来创建用于研究细胞生物学的模型系统。3D细胞培养通过促进与基质更自然的相互作用,甚至允许细胞分泌自己的基质,比2D环境更接近地模拟组织或肿瘤环境。3D细胞培养还提供了更多的自然细胞到细胞的接触,并产生了O2和养分。

通常,与单层细胞培养相比,3D细胞培养可以揭示细胞反应的显著差异。通过观察细胞健康、代谢和表达的变化,可以监测3D培养中的细胞生物学。最终,这些表型变化与细胞的基因型相关,或者基因型的改变导致了疾病状态。我们提供分析和工具来解决您工作流程中的每个步骤,从细胞健康和代谢变化到基因表达和分析。

新3D细胞培养?

了解3D细胞培养,为什么和如何使用它们,以及如何选择3D模型的分析。

3D细胞培养指南
3D分析在实验室中是如何工作的?

了解一个实验室如何在卵巢癌研究的3D模型中使用细胞健康分析。

阅读案例研究

细胞健康的变化

大多数细胞健康检测是设计用来监测单层培养的细胞。使用3D培养的细胞,无论是球形培养或在水凝胶基质上,提供了挑战。如果你需要从细胞质中分离出蛋白质或代谢物,标准方案不太可能在3D培养中起作用。必须对3D培养的方案和试剂进行优化。CellTiter- Glo®3D检测是优化了更多的洗涤剂和专门的协议。我们已经开发了优化的方案,可用于3D培养,用于我们其他几种常用的单层培养方法。

特色产品

CellTiter-Glo®3D细胞活力检测

溶解性试验

用专门为3D培养设计的试剂测量ATP来监测细胞活力。采用与经典CellTiter-Glo®检测相同的ATP测量荧光素酶化学,具有更强的溶解能力,允许更深的渗透,产生更大的定量ATP释放。使用CellTox™Green细胞毒性试验的同孔多路复用共检测死亡细胞,或使用LDH-Glo™细胞毒性试验的培养基取样共检测死亡细胞。

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Celltiter-Glo®D3D的Lytic容量与Atlite 1Step试剂相比
Celltiter-Glo®D3D的Lytic容量与Atlite 1Step试剂相比

细胞生存能力

RealTime-Glo™MT细胞活力检测

Non-Lytic化验

通过生物发光测定连续监测细胞活力最多可达72小时。极其敏感的测定监测细胞减少等同物。将核酸与基因表达或基因组分析相同孔。用CellTox™绿色复用还测量死细胞。

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real - time - glo™MT细胞活力检测对增加HCT116球体直径的响应
RealTime-Glo&trade响应;MT细胞存活率测定提高HC116球形直径

应用笔记中的详细信息(下面的链接)。

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细胞毒性

LDH-Glo™细胞毒性试验

Non-Lytic化验

用这种敏感的生物荧光法测定乳酸脱氢酶释放的细胞毒性。每个时间点只需要2-5μl培养基,允许在同一孔中多次取样。用于在其他细胞检测之前检测细胞毒性,如CellTiter- Glo®3D或Caspase-Glo®3/7检测。

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LDH-Glo™分析和CellTiter-Glo®分析复用
LDH-Glo™分析和CellTiter-Glo®分析复用

用黄曲霉毒素B1处理人肝显微组织球体48小时。收集培养基样品,用LDH-Glo™Assay检测。剩余的细胞用CellTiter-Glo®3D Assay检测活力。细节中可用技术手册TM548

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细胞毒性

CellTox™绿色细胞毒性检测

Non-Lytic化验

通过荧光试验连续监测细胞毒性72小时。细胞不透性DNA结合染料进入细胞膜受损的细胞并染色细胞DNA。Multiplex与RealTime- Glo™MT连续监测活细胞和死细胞或使用CellTiter-Glo®3D终点分析的上游。

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多路复用技术同样可以监控活细胞和死细胞
多路复用技术同样可以监控活细胞和死细胞

科学海报的详细信息(下面的链接)。

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细胞凋亡

Caspase-Glo®3/7 3D检测

溶解性试验

使用敏感的生物发光测定来监测细胞凋亡,测量Caspase-3和-7活性。多重与细胞毒性和细胞活力测定以更完整的凋亡反应表征。

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复用CellTox™Green细胞毒性试验、CellTiter-Fluor™细胞活力试验和Caspase-Glo 3/7 3D试验
复用Celltox™绿色细胞毒性测定和Caspase-glo 3/7测定

在24小时接触Bortezomib后,在A549球状体上相同良好复用。使用Glomax®发现仪器测量荧光和发光。

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细胞凋亡

Realtime-Glo™膜蛋白V细胞凋亡和坏死测定

Non-Lytic化验

通过多重生物发光膜联蛋白V检测和荧光坏死检测连续48小时监测凋亡和二次坏死。将核酸与基因表达或基因组分析相同孔。

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Annexin V暴露与HepG2球状细胞继发性坏死的测定
Annexin V暴露与HepG2球状细胞继发性坏死的测定

使用real - time - glo™annexin V凋亡和坏死实验检测HepG2球状细胞在紫杉醇照射48小时后的annexin V暴露和继发坏死。发光和荧光测量与GloMax®Discover仪器。

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ADME

P450‐Glo™CYP3A4检测和筛选系统

Non-Lytic分析选项

监测细胞色素P450酶的活化(CYP1A2,CYP2B6CYP2C9也可用)通过生物荧光分析。非溶性方案选择使用相同的方案单层和3D培养,原底物扩散到细胞中,通过CYP活性转化为荧光素。荧光素扩散出细胞,在培养基上进行实验。细胞可以用于其他基于细胞的检测或核酸提取。

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监测人肝脏显微组织CYP3A4活性和生存能力
监测人肝脏显微组织细胞色素P450 3A4的活性和活力

监测人肝脏显微组织细胞色素P450 3A4活性和利福平反应的活力。CYP3A4活性的测定使用非溶性P450-Glo™3A4测定荧光素ipa,然后用CellTiter- Glo®3D测定生存力。使用GloMax®Discover仪器测量。

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自噬

自噬LC3 Hibit报告系统

Non-Lytic化验

监测自噬LC3-II通量与基于生物荧光板的分析。用LC3 HiBiT报告基因稳定转染细胞,在3D培养基中生长,并使用溶性HiBiT检测系统进行监测。本报告还允许通过荧光显微镜监测LC3-II蛋白。

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LC3 HiBiT报告基因表达的HEK293球状体对自噬刺激因子和抑制因子的响应
LC3 HiBiT报告基因表达的HEK293球状体对自噬刺激因子和抑制因子的响应

科学海报的详细信息(下面的链接)。

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代谢变化

能量代谢对于细胞健康和功能和代谢物与细胞能量,蜂窝构建块和信号通路的创建相关。我们提供多种测定以测量具有用于3D细胞培养应用的优化方案的代谢活动,包括乳酸,谷氨酰胺,氧化应激和二核苷酸检测测定。亚博网站怎么样常见的样品制备允许使用相同样品与血糖-Glo™,乳酸-Glo™,乳糖-Glo™,谷氨酰胺/谷氨酰胺-Glo™测定的共测。

特色产品

Glucose-Glo™试验

Non-Lytic分析选项

敏感的生物荧光测量葡萄糖。只需要2-5μl条件细胞培养基每个时间点允许多个样品每孔的时间过程研究。在微球条件培养基上进行试验。

获取技术手册 了解更多
胰岛素介导的ICELL®肝细胞球体葡糖生成的抑制作用
胰岛素介导的冰细胞肝细胞球状体糖异生抑制数据图13890mb-w

核苷酸及辅助因子检测

NAD/NADH-Glo™和NADP/ NADPH-Glo™分析

溶解性试验

监测NAD+/NADH或NADP/NADPH的比率。裂解液通过酸/碱反应进行分解,以氧化或还原形式的NAD+或NADH。对标准的单层协议进行了轻微的修改(详情见下面的海报链接)。

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培养的HCT116球状体中NAD+和NADH水平的测定
培养的HCT116球状体中NAD+和NADH水平的测定

培养直径培养的HCT116球体中NAD +和NADH水平的测量。用Celltiter-glo 3D(信号与直径相关)测量的平行孔。科学海报的详细信息(下面的链接)。

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代谢物检测

Lactate-Glo™试验

Non-Lytic分析选项

使用非溶性、敏感的生物荧光检测选项监测3D培养中的乳酸变化。每个时间点只需要2-5μl培养基,允许同一孔中有多个样品。细胞可用于其他基于细胞的分析或核酸分离。

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氧化应激

谷胱甘肽/ GSSG-Glo™试验

溶解性试验

用敏感的生物荧光法监测谷胱甘肽/谷胱甘肽比值的变化。对平行井进行总谷胱甘肽+谷胱甘肽和仅谷胱甘肽处理,得到谷胱甘肽/谷胱甘肽比值。小程序从单层(5分钟摇匀)改变为3D培养(30分钟摇匀)。CellTox™Green可用于上游监测细胞毒性。

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监测总谷胱甘肽和HCT 116球状体平行孔的活力
监测总谷胱甘肽和HCT 116球状体平行孔的活力

在使用GSH/GSSG-Glo™或CellTiter-Glo®3D Assay测定总谷胱甘肽之前,用buthionine sulfoximine处理球体48小时。科学海报的详细信息(下面的链接)。

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代谢物检测

Glutamate-Glo™试验

Non-Lytic分析选项

监测谷氨酸变化在3D培养使用非溶解,敏感的生物荧光检测选项。测定需要在每个时间点2-5μl培养基上,允许多个样品从同一孔。细胞可用于其他基于细胞的分析或核酸分离。

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代谢物检测

谷氨酰胺/ Glutamate-Glo™试验

Non-Lytic分析选项

监测谷氨酰胺和谷氨酸在3D培养使用非溶解,敏感的生物荧光检测选项。基于谷氨酰胺转化为谷氨酸的谷氨酰胺测定。每个时间点只需要2-5μl培养基,允许同一孔中有多个样品。细胞可用于其他基于细胞的测定或核酸提取。

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氧化应激

ROS-Glo™H2O2分析

Non-Lytic分析选项

通过生物发光H监测活性氧物种2O2化验。荧光素底物与H直接反应2O2和测定组分转化为荧光素的活化的前磷脂以进行生物发光检测。单层和3D培养的相同方案。细胞可用于其他基于细胞的测定或核酸提取。

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HepG2球状体对ros诱导的甲萘酮的反应
HepG2球状体对甲萘酮的反应

不同直径的HepG2球状体对不同浓度甲萘酮的响应。细胞在超低附着板中培养4天(康宁)。H2O2ROS-Glo™H测量的水平2O2在GloMax®Discover仪器上测定和读取。应用笔记中的详细信息(下面的链接)。

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表达的变化

与单层培养物相比,3D培养中生长的细胞可以具有基因表达的差异。细胞对细胞触点和细胞对基质触点的变化将是非常不同的,并且培养物内的氧气和营养物的梯度也将影响基因表达。为了分析基因表达的差异,必须分离和量化RNA。然后,通过RT-QPCR分析特定基因,或通过RNA-SEQ等技术监测细胞变化。

特色产品

ReliacPrep™RNA MiniPrep系统

从3D培养物中分离可用于应用的总RNA或miRNA,以监测表达的变化。ReliaPrep™RNA Miniprep系统与real - time - glo™MT细胞活力测定等非溶性细胞测定协同工作。

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从HEK293显微组织球体中提取RNA
从HEK293显微组织球体中提取RNA

基因组分析

了解基因型-表现型或表现型-基因型差异很重要,特别是在研究原发细胞或肿瘤时。你可以分析一个基因型,并使用3D细胞培养来理解表现型,或者你可以选择研究表现型,然后查看基因型来理解这些变化发生的原因。对于基因组DNA分析,您将需要提取和量化DNA。然后你将通过qPCR检查特定的基因或选择用NGS检查基因组。如果你是在处理原代细胞,你必须能够区分出哪种样本来自于哪种供体- str类型的细胞。STR配置文件对确认你正在工作的细胞是你真正想要的细胞也很重要。

特色产品

Maxwell®RSC培养细胞DNA套件

利用Maxwell®RSC仪器,从3D培养物中分离出适合应用的基因组DNA,用于基因组分析。提纯后的DNA 45分钟后就可以分析了。分离出的gDNA可用于基于qpcr的基因拷贝数和生物标记分析,基于str的分析用于样本跟踪或验证,以及基于测序的分析。

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Maxwell®RSC培养细胞DNA试剂盒从不同起始量的HCT116细胞中分离的DNA浓度
Maxwell®RSC培养细胞DNA试剂盒从不同起始量的HCT116细胞中分离的DNA浓度
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