用于监测3D细胞培养中的生物学的分析和工具
研究人员正转向3D培养方法来创建用于研究细胞生物学的模型系统。3D细胞培养通过促进与基质更自然的相互作用，甚至允许细胞分泌自己的基质，比2D环境更接近地模拟组织或肿瘤环境。3D细胞培养还提供了更多的自然细胞到细胞的接触，并产生了O2和养分。
通常，与单层细胞培养相比，3D细胞培养可以揭示细胞反应的显著差异。通过观察细胞健康、代谢和表达的变化，可以监测3D培养中的细胞生物学。最终，这些表型变化与细胞的基因型相关，或者基因型的改变导致了疾病状态。我们提供分析和工具来解决您工作流程中的每个步骤，从细胞健康和代谢变化到基因表达和分析。
细胞健康的变化
大多数细胞健康检测是设计用来监测单层培养的细胞。使用3D培养的细胞，无论是球形培养或在水凝胶基质上，提供了挑战。如果你需要从细胞质中分离出蛋白质或代谢物，标准方案不太可能在3D培养中起作用。必须对3D培养的方案和试剂进行优化。CellTiter- Glo®3D检测是优化了更多的洗涤剂和专门的协议。我们已经开发了优化的方案，可用于3D培养，用于我们其他几种常用的单层培养方法。
细胞生存能力
RealTime-Glo™MT细胞活力检测
Non-Lytic化验
通过生物发光测定连续监测细胞活力最多可达72小时。极其敏感的测定监测细胞减少等同物。将核酸与基因表达或基因组分析相同孔。用CellTox™绿色复用还测量死细胞。
real - time - glo™MT细胞活力检测对增加HCT116球体直径的响应
应用笔记中的详细信息（下面的链接）。
细胞毒性
LDH-Glo™细胞毒性试验
Non-Lytic化验
用这种敏感的生物荧光法测定乳酸脱氢酶释放的细胞毒性。每个时间点只需要2-5μl培养基，允许在同一孔中多次取样。用于在其他细胞检测之前检测细胞毒性，如CellTiter- Glo®3D或Caspase-Glo®3/7检测。
LDH-Glo™分析和CellTiter-Glo®分析复用
用黄曲霉毒素B1处理人肝显微组织球体48小时。收集培养基样品，用LDH-Glo™Assay检测。剩余的细胞用CellTiter-Glo®3D Assay检测活力。细节中可用技术手册TM548。
细胞毒性
CellTox™绿色细胞毒性检测
Non-Lytic化验
通过荧光试验连续监测细胞毒性72小时。细胞不透性DNA结合染料进入细胞膜受损的细胞并染色细胞DNA。Multiplex与RealTime- Glo™MT连续监测活细胞和死细胞或使用CellTiter-Glo®3D终点分析的上游。
多路复用技术同样可以监控活细胞和死细胞
科学海报的详细信息（下面的链接）。
细胞凋亡
Caspase-Glo®3/7 3D检测
溶解性试验
使用敏感的生物发光测定来监测细胞凋亡，测量Caspase-3和-7活性。多重与细胞毒性和细胞活力测定以更完整的凋亡反应表征。
复用CellTox™Green细胞毒性试验、CellTiter-Fluor™细胞活力试验和Caspase-Glo 3/7 3D试验
在24小时接触Bortezomib后，在A549球状体上相同良好复用。使用Glomax®发现仪器测量荧光和发光。
细胞凋亡
Realtime-Glo™膜蛋白V细胞凋亡和坏死测定
Non-Lytic化验
通过多重生物发光膜联蛋白V检测和荧光坏死检测连续48小时监测凋亡和二次坏死。将核酸与基因表达或基因组分析相同孔。
Annexin V暴露与HepG2球状细胞继发性坏死的测定
使用real - time - glo™annexin V凋亡和坏死实验检测HepG2球状细胞在紫杉醇照射48小时后的annexin V暴露和继发坏死。发光和荧光测量与GloMax®Discover仪器。
ADME
P450‐Glo™CYP3A4检测和筛选系统
Non-Lytic分析选项
监测细胞色素P450酶的活化(CYP1A2,CYP2B6和CYP2C9也可用)通过生物荧光分析。非溶性方案选择使用相同的方案单层和3D培养，原底物扩散到细胞中，通过CYP活性转化为荧光素。荧光素扩散出细胞，在培养基上进行实验。细胞可以用于其他基于细胞的检测或核酸提取。
监测人肝脏显微组织CYP3A4活性和生存能力
监测人肝脏显微组织细胞色素P450 3A4活性和利福平反应的活力。CYP3A4活性的测定使用非溶性P450-Glo™3A4测定荧光素ipa，然后用CellTiter- Glo®3D测定生存力。使用GloMax®Discover仪器测量。
代谢变化
能量代谢对于细胞健康和功能和代谢物与细胞能量，蜂窝构建块和信号通路的创建相关。我们提供多种测定以测量具有用于3D细胞培养应用的优化方案的代谢活动，包括乳酸，谷氨酰胺，氧化应激和二核苷酸检测测定。亚博网站怎么样常见的样品制备允许使用相同样品与血糖-Glo™，乳酸-Glo™，乳糖-Glo™，谷氨酰胺/谷氨酰胺-Glo™测定的共测。
核苷酸及辅助因子检测
NAD/NADH-Glo™和NADP/ NADPH-Glo™分析
溶解性试验
监测NAD+/NADH或NADP/NADPH的比率。裂解液通过酸/碱反应进行分解，以氧化或还原形式的NAD+或NADH。对标准的单层协议进行了轻微的修改(详情见下面的海报链接)。
培养的HCT116球状体中NAD+和NADH水平的测定
培养直径培养的HCT116球体中NAD +和NADH水平的测量。用Celltiter-glo 3D（信号与直径相关）测量的平行孔。科学海报的详细信息（下面的链接）。
代谢物检测
Lactate-Glo™试验
Non-Lytic分析选项
使用非溶性、敏感的生物荧光检测选项监测3D培养中的乳酸变化。每个时间点只需要2-5μl培养基，允许同一孔中有多个样品。细胞可用于其他基于细胞的分析或核酸分离。
氧化应激
谷胱甘肽/ GSSG-Glo™试验
溶解性试验
用敏感的生物荧光法监测谷胱甘肽/谷胱甘肽比值的变化。对平行井进行总谷胱甘肽+谷胱甘肽和仅谷胱甘肽处理，得到谷胱甘肽/谷胱甘肽比值。小程序从单层(5分钟摇匀)改变为3D培养(30分钟摇匀)。CellTox™Green可用于上游监测细胞毒性。
监测总谷胱甘肽和HCT 116球状体平行孔的活力
在使用GSH/GSSG-Glo™或CellTiter-Glo®3D Assay测定总谷胱甘肽之前，用buthionine sulfoximine处理球体48小时。科学海报的详细信息（下面的链接）。
表达的变化
与单层培养物相比，3D培养中生长的细胞可以具有基因表达的差异。细胞对细胞触点和细胞对基质触点的变化将是非常不同的，并且培养物内的氧气和营养物的梯度也将影响基因表达。为了分析基因表达的差异，必须分离和量化RNA。然后，通过RT-QPCR分析特定基因，或通过RNA-SEQ等技术监测细胞变化。
基因组分析
了解基因型-表现型或表现型-基因型差异很重要，特别是在研究原发细胞或肿瘤时。你可以分析一个基因型，并使用3D细胞培养来理解表现型，或者你可以选择研究表现型，然后查看基因型来理解这些变化发生的原因。对于基因组DNA分析，您将需要提取和量化DNA。然后你将通过qPCR检查特定的基因或选择用NGS检查基因组。如果你是在处理原代细胞，你必须能够区分出哪种样本来自于哪种供体- str类型的细胞。STR配置文件对确认你正在工作的细胞是你真正想要的细胞也很重要。
