什么是蛋白质表达
最常用的无用的细胞表达系统源自兔网,小麦胚芽和大肠杆菌。有两种基于兔网织红细胞的细胞自由表达系统:翻译系统和耦合翻译和转录(TNT®)系统。两者都提供翻译所需的大分子成分,如核糖体、trna、氨基酰基trna合成酶、起始因子、延伸因子和终止因子。在翻译系统中使用mRNA模板或在耦合的转录和翻译系统中使用DNA模板(质粒DNA或PCR片段),可以在几小时内完成蛋白质合成。
T7 RNA聚合酶系统是生产蛋白质的最常用方法大肠杆菌。在该系统中,将含有感兴趣基因的表达载体克隆到T7启动子下游,被引入T7表达宿主中。T7表达宿主,例如DE3菌株具有噬菌体T7 RNA聚合酶基因的染色体拷贝。当向培养物中加入诸如IPTG或鼠李酮的诱导剂时,表达T7 RNA聚合酶并转录感兴趣的基因,然后通过内源蛋白翻译机械翻译所需的蛋白质。Promega提供即用型富集细胞,用于表达重组蛋白大肠杆菌。