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蛋白表达

重组蛋白是一种由基因重组dna编码的蛋白,该基因已被克隆在一个支持基因表达和信使RNA翻译的系统中。通过重组DNA技术修饰该基因可导致突变蛋白的表达。Promega提供以细胞为基础表达重组蛋白的产品大肠杆菌系统和各种细胞游离系统,如兔网红细胞裂解液(RRL)或小麦胚芽提取物(WGE)。

什么是蛋白质表达

最常用的无用的细胞表达系统源自兔网,小麦胚芽和大肠杆菌。有两种基于兔网织红细胞的细胞自由表达系统:翻译系统和耦合翻译和转录(TNT®)系统。两者都提供翻译所需的大分子成分,如核糖体、trna、氨基酰基trna合成酶、起始因子、延伸因子和终止因子。在翻译系统中使用mRNA模板或在耦合的转录和翻译系统中使用DNA模板(质粒DNA或PCR片段),可以在几小时内完成蛋白质合成。

T7 RNA聚合酶系统是生产蛋白质的最常用方法大肠杆菌。在该系统中,将含有感兴趣基因的表达载体克隆到T7启动子下游,被引入T7表达宿主中。T7表达宿主,例如DE3菌株具有噬菌体T7 RNA聚合酶基因的染色体拷贝。当向培养物中加入诸如IPTG或鼠李酮的诱导剂时,表达T7 RNA聚合酶并转录感兴趣的基因,然后通过内源蛋白翻译机械翻译所需的蛋白质。Promega提供即用型富集细胞,用于表达重组蛋白大肠杆菌