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测序:NGS和Sanger测序

在下一代测序工作流中,从样品中提取核酸并碎片,排列成平台特异性文库构建体,扩增和测序。无论使用的样本类型还是使用的平台,在整个工作流程中的每一步都对于成功的结果至关重要。

支撑NGS工作流的Promega产品包括在测序之前的文库制备的Pronex®NGS定量和大小选择性DNA纯化系统,以及核酸提取和定量系统。光谱致密毛细管电泳系统支持Sanger测序应用,例如NGS碱呼叫的验证和转化培养物中的基因组编辑的确认。亚博网站怎么样

NGS和Sanger测序介绍

从基础科学到转化研究,下一代测序(NGS,也被称为大规模平行测序)为基因组学、肿瘤学和生态学的研究开辟了新的途径。NGS技术的可用性使测序成为诊断、法医和流行病学调查的常规和可行选择,并使许多基因组分析应用取得进展。亚博网站怎么样

在桑格测序(第一代测序)中,DNA片段是通过结合链末端核苷酸进行测序的,然后用电泳分离,用荧光信号检测。在NGS中,数百万个DNA片段被平行测序,核苷酸被添加到DNA链上时被检测到。DNA提取和片段化后,每个DNA模板用PCR扩增成簇,并附着在固体表面。然后用核苷酸对它们进行询问,并在DNA测序时进行成像/测量。

有几种可用的NGS技术:Illumina测序仪使用可逆终止染料标记核苷酸来询问捕获的DNA。一旦每个碱基被读取,终止子和染料被切割和洗涤除去,创造一个正常的核苷酸。这条链再次展开,这个过程沿着这条链重复进行测序。与使用染料标记的核苷酸不同,离子激流测序仪测量碱基结合时氢离子的释放,454系统测量核苷酸结合时的发光。这些测序仪可以并行处理大量样本,提高速度和吞吐量,并使整个基因组的测序在短时间内既可实现又可负担得起。